在上期中，我们介绍了细胞转染的应用及分类基础知识，本期将继续为大家普及与细胞转染相关的病毒转染内容。病毒转染是一种以病毒载体为媒介的高效细胞转染技术，它通过将外源基因包装进病毒外壳，利用病毒的自然感染特性将外源基因导入宿主细胞中，并实现外源基因在细胞内的稳定表达。根据病毒载体的不同，常见的有腺病毒（Adenovirus，ADV）、慢病毒（Lentivirus，LV）、逆转录病毒（Retrovirus，RV）和腺相关病毒（AAV）等。其中，慢病毒因其广泛的应用范围而受到实验室的青睐，接下来我们将重点讲解慢病毒相关内容。

一、慢病毒的结构

慢病毒是以HIV-1为基础发展的基因治疗载体，属于有包膜的RNA病毒，直径为80-120nm，呈二十面体对称的球形结构。慢病毒颗粒的最外层是包膜，包膜蛋白决定了其感染细胞的类型，内层则依次为基质蛋白和衣壳，而最内部则包含两条相同的正链RNA和一些重要的酶，如逆转录酶、整合酶及蛋白酶。

慢病毒的基因组结构相对复杂，以HIV-1为例，它是单链RNA病毒，共包含9个基因。基因组的两端各有一段反向末端重复序列（LTR），中间则包括gag、pol、env三个编码病毒结构的基因，tat、rev两个调节基因，以及vif、vpr、vpu和nef四个辅助基因。随着对慢病毒基因组的深入研究和转染技术的发展，研究者们对其基因组进行了编辑，将不同的基因分布在多个质粒中，逐步提高了其安全性和包装能力，从而发展出了第一代、第二代和第三代慢病毒系统。目前，第二代三质粒系统和第三代四质粒系统应用最为广泛。

二、慢病毒的复制与包装

为了提高靶细胞的转染效率，前期需要获得高滴度的慢病毒，这就是慢病毒的复制包装过程。通常情况下，将三种质粒按照一定比率共同转染到293T细胞中，并进行48-72小时的孵育，随后收集含有病毒的上清液，进行离心和浓缩。

三、慢病毒感染细胞的过程

慢病毒感染细胞的第一步是通过其包膜蛋白与宿主细胞表面的受体结合。一旦与宿主细胞膜融合，病毒内部的结构蛋白、酶蛋白和病毒核心会释放出来。在逆转录酶的作用下，慢病毒RNA会被逆转录，并与整合酶形成整合前复合物。随后，这一复合物进入宿主细胞核后，由整合酶催化整合至宿主的基因组中，最终外源基因在宿主细胞质中启动表达。

四、常见慢病毒转染类型

1. 慢病毒荧光转染：将标记有荧光团（如GFP、mCherry、RFP等）的基因导入细胞后，筛选出带有荧光蛋白的细胞。这些细胞在吸收激发能量后，会发射出特定波长的光，从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪来检测转染效率。

2. 慢病毒Luciferase化学发光转染：通过导入荧光素酶基因（Luc），细胞中将产生能够催化荧光素底物的荧光素酶。加入荧光素底物后，在ATP的作用下，底物会氧化并发出绿色或黄色光，通过高灵敏度的生物发光成像技术检测光强度的变化，特别是在活体动物中监测肿瘤生长和转移。

3. 慢病毒细胞永生化转染：通过慢病毒转染技术，将外源性永生化基因导入原代细胞，打破细胞的分裂次数限制，使其获得无限增殖的能力，从而延缓细胞的衰老和死亡。

尊龙凯时生物公司针对多种常用细胞系和原代细胞提供慢病毒转染服务，包括转染绿色荧光蛋白（ZsGreen）、红色荧光蛋白（mCherry、RFP）、化学发光LUC以及SV40永生化转染，总计近40种稳转细胞系。此外，我们还支持特定细胞的慢病毒转染需求。

综上所述，慢病毒转染是一项重要的生物医学技术，尊龙凯时致力于为科研和医疗领域提供优质的转染服务，促进基因治疗和细胞工程的发展。